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本试剂盒利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理，采用独特配方，所配制的凝胶具有类似梯度胶分离能力（10～250kDa），低、中、高分子量蛋白可均匀分布，无需区分不同浓度下层胶；试剂盒采用上层胶和下层胶的预混配方，只需加入改良型促凝剂即可凝胶，灌入下层胶后，无需等待凝胶，直接灌入上层胶即可，简便快捷；所配的上层胶为红色，点样孔清晰易辨，方便点样。

本制品专门用于SDS-PAGE电泳（不适用于非变性电泳），包含全套PAGE凝胶制备试剂和配套电泳缓冲液，并且在200～250V恒压条件下，25～35min即可完成电泳。本制品配套提供改良型促凝剂，其具有更好的稳定性和催化效能，配胶过程中无需额外添加TEMED。

• 分离范围广：所配制凝胶具有类似梯度胶分离能力，无需区分不同浓度下层胶。
  
• 电泳速度快：200～250V恒压，25～35min即可完成电泳。
  
• 快速制备凝胶：无需液封等待下层胶凝固，即可直接灌注上层胶，制胶更省时。
  
• 红色上层胶：可制备带颜色的上层胶，为点样和区分不同凝胶提供便利。
  
• 避免异味：无需使用TEMED，环境安全友好。

本试剂盒大约可以配制60-125块常规大小（8×10cm）的PAGE凝胶，具体数量根据凝胶厚度决定：0.75mm厚度凝胶可以配制125块胶，1.0mm厚度凝胶可以配制至少90块胶，1.5mm厚度凝胶可以配制至少60块胶。

• 即用型改良型促凝剂配制：试剂盒提供的改良型促凝剂为干粉，第一次使用前加入10mL超纯水，彻底溶解后使用。配制好的即用型改良型促凝剂置于4℃备用，长期不用建议-20℃贮存。
  
• 推荐操作：实验前半小时，取出试剂盒所有组份，常温静置半小时使溶液恢复到常温后轻柔混匀后使用，可以有效降低制胶时产生气泡的可能性。

• 取等体积红色上层胶缓冲液和上层胶溶液，各0.5/0.75/1.0mL，混匀。
  
  由于染料的特殊理化性质，红色上层胶缓冲液使用前请摇匀。
  
  
• 取等体积下层胶缓冲液和下层胶溶液，各2.0/2.5/4.0mL，混匀。
  
• 向步骤1的上层胶混合溶液中加入10/15/20μL改良型促凝剂，轻轻混匀。
  
  加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。
  
  
• 向步骤2的下层胶混合溶液中加入40/50/80μL改良型促凝剂，轻轻混匀；将溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离为约1.5cm或距离梳齿下沿距离为约0.5cm即可。
  
  此溶液为过量，请勿全部注入，可留少许于制胶杯中，便于判断凝胶状态；加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。
  
  
• 无需等待下层胶凝固，迅速将步骤3的上层胶混合溶液左右平移缓慢轻柔注入制胶玻璃板中，插入梳齿。
  
  加入下层胶混合液后，请在1～2分钟内灌注上层胶混合溶液，加入时一定要轻缓，避免将上层胶溶液冲入下层胶；凝固后上下层胶分界线平整度略弱于使用封闭方法配制的凝胶，但对后续电泳没有影响。
  
  
• 待胶凝固后拔去梳齿，用注射器或枪头吸取电泳缓冲液将加样孔冲洗干净，即可进行常规电泳操作。
  
  凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。

• 1×即用型快速电泳缓冲液配制：
  

  成分	500mL配制量	1000mL配制量
  20×快速电泳缓冲液	25mL	50mL
  超纯水	定容至500mL	定容至1000mL

  
  
• 电泳参数：
  

  电泳缓冲液	1×即用型快速电泳缓冲液
  上样缓冲液	5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(变性，还原)
  电泳条件	恒压200 V，~35min 恒压250 V，~25min

  本制品所配制凝胶需搭配快速电泳缓冲液使用，才能得到类梯度分离蛋白的效果。

• 凝胶染色可以选择QuickLan蛋白染色液，可以在30分钟内完成染色和脱色，也可以选择常规法考马斯亮蓝染色液。
  
• 转膜缓冲液可以使用湿转法或半干转方法转膜。湿转法可以使用经典10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液(湿转)或者使用10×TrueBlot快速转膜液。半干转转膜可以使用5×快速半干转转膜缓冲液。